幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測

基本信息

專科分類： 生長發(fā)育檢查
檢查分類： 血液檢查
適用性別： 男女均適用
是否空腹： 　空腹
手術(shù)參考價： 45元
科　室： 生長發(fā)育檢查

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測檢查簡介

幽門螺桿菌免疫學(xué)檢查是通過測定血清中的幽門螺旋桿菌抗體來檢測幽門螺旋桿菌感染，包括補被動血凝測定、免疫印跡技術(shù)和酶聯(lián)合吸附測定(ELISA)等。

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測檢查過程

一、被動血凝測定

患者刺取腦脊液，采用稀釋抗原固定血清法用96孔V型微量血凝板,將乙腦抗原作倍比稀釋,使每孔含25uL,被檢血清用稀釋液作1：10稀釋,每孔加人25uL產(chǎn),再滴加凍干乙腦單克隆抗體致敏羊血紅細胞25uL，37℃下放置數(shù)小時后觀察結(jié)果。

二、免疫印跡技術(shù)

(一)蛋白質(zhì)樣品獲得：細菌誘導(dǎo)表達后，可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞，真核細胞加勻漿緩沖液，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃，13,000g離心15min。取上清液作為樣品。

(二)電泳：制備電泳凝膠，進行SDS-PAGE。

(三)轉(zhuǎn)移：(半干式轉(zhuǎn)移)

1、電泳結(jié)束后將膠條割至合適大小，用轉(zhuǎn)膜緩沖液平衡，5min×3次。

2、膜處理：預(yù)先裁好與膠條同樣大小的濾紙和NC膜，浸入轉(zhuǎn)膜緩沖液中10min。

3、轉(zhuǎn)膜：轉(zhuǎn)膜裝置從下至上依次按陽極碳板、24層濾紙、NC膜、凝膠、24層濾紙、陰極碳板的順序放好，濾紙、凝膠、NC膜精確對齊，每一步去除氣泡，上壓500g重物，將碳板上多余的液體吸干。接通電源,恒流1mA/cm2，轉(zhuǎn)移1.5hr。轉(zhuǎn)移結(jié)束后，斷開電源將膜取出,割取待測膜條做免疫印跡。將有蛋白標準的條帶染色，放入膜染色液中50s后，在50%甲醇中多次脫色，至背景清晰，然后用雙蒸水洗，風(fēng)干夾于兩層濾紙中保存，留與顯色結(jié)果作對比。

(四)免疫反應(yīng)：

1、用0.01MPBS洗膜，5min×3次。

2、加入包被液，平穩(wěn)搖動，室溫2hr。

3、棄包被液，用0.01MPBS洗膜，5min×3次。

4、加入一抗(按合適稀釋比例用0.01MPBS稀釋，液體必須覆蓋膜的全部)，4℃放置12hr以上。陰性對照，以1%BSA取代一抗，其余步驟與實驗組相同。

5、棄一抗和1%BSA，用0.01MPBS分別洗膜，5min×4次。

6、加入辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗(按合適稀釋比例用0.01MPBS稀釋)，平穩(wěn)搖動，室溫2hr。

7、棄二抗，用0.01MPBS洗膜，5min×4次。

8、加入顯色液，避光顯色至出現(xiàn)條帶時放入雙蒸水中終止反應(yīng)。

三、酶聯(lián)合吸附測定

常用的ELISA法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。

1.間接ELISA

本法主要用于檢測抗體。間接ELISA的操作程序如下。

(1)材料

①包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;

②DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清.

③ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。

(2)方法步驟

①加抗原包被→4℃過夜，洗滌三次、拋干

②加待檢血清→37℃2小時，洗滌三次、拋干

③加酶標抗體→37℃2小時，洗滌三次、拋干

④加底物液→37℃30分鐘，加終止液

⑤用ELISA檢測儀測定OD值，并計算出P/N比值。

2.雙抗體夾心ELISA

本法主要用于檢測大分子抗原。

①加抗體包被→4℃過夜，洗滌三次、拋干

②加待檢抗原→37℃30分鐘，洗滌三次、拋干

③加酶標抗體→37℃30分鐘，洗滌三次、拋干

④加底物液→37℃15分鐘，加終止液

⑤用ELISA檢測儀測定OD值。

相關(guān)醫(yī)生
更多>

李秀蓮 主任醫(yī)師

未開通

青海省婦女兒童醫(yī)院兒科

擅長疾病：新生兒疾病的診斷、治療與護理。
盧秀英 主任醫(yī)師

未開通

青海省婦女兒童醫(yī)院急救科

擅長疾病：危重病的救治。
席時華 主任醫(yī)師

未開通

烏魯木齊市友誼醫(yī)院眼底

擅長疾病：青光眼的早期診斷及難治性青光眼的治療，眼底疾病及小兒弱視診治
李晶主任醫(yī)師

未開通

烏魯木齊市友誼醫(yī)院眼底

擅長疾病：眼科常見病、多發(fā)病的診斷、治療，特別是對準分子激光治療近視、青光眼、淚道疾病及眼外傷的治療積累了豐富的臨床經(jīng)驗

專家推薦

李秀蓮新生兒疾病的診斷、治療與護理。

擅長：主任醫(yī)師

著名中醫(yī)腫瘤學(xué)家及中西醫(yī)結(jié)合臨床腫瘤學(xué)家，現(xiàn)為廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院副院長，醫(yī)學(xué)博士、教授、博
盧秀英危重病的救治。

擅長：主任醫(yī)師

從事兒內(nèi)、急救專業(yè)近四十年，具有豐富的危重癥及疑難雜癥搶救治療經(jīng)驗。特別擅長各種休克、中毒、抽搐等
席時華青光眼的早期診斷及難治性青光眼的治療，眼底疾病及小兒弱視診治

擅長：主任醫(yī)師

從事眼科臨床工作40余年，具有極豐富的臨床經(jīng)驗及診治疑難眼病的能力，尤其擅長青光眼的早期診斷及難治
李晶眼科常見病、多發(fā)病的診斷、治療，特別是對準分子激光治療近視、青光眼、淚道疾病及眼外傷的治療積累了豐富的臨床經(jīng)驗

擅長：主任醫(yī)師

李晶，女，1962年12月生，漢族，陜西人。1985年畢業(yè)于新疆醫(yī)學(xué)院醫(yī)療系，學(xué)士學(xué)位。畢業(yè)后分配
熱西提內(nèi)科心血管疾病的診斷與治療

擅長：主任醫(yī)師

1965年畢業(yè)于新疆醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)療學(xué)，擅長內(nèi)科心血管疾病的診斷與治療，曾獲自治區(qū)優(yōu)秀專家稱號。全國

疾病科室

更多 >

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測-檢查項目-大眾養(yǎng)生網(wǎng)

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測

基本信息

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測檢查簡介

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測檢查過程

相關(guān)醫(yī)生
更多>

相關(guān)醫(yī)院

專家推薦

李秀蓮新生兒疾病的診斷、治療與護理。

盧秀英危重病的救治。

席時華青光眼的早期診斷及難治性青光眼的治療，眼底疾病及小兒弱視診治

李晶眼科常見病、多發(fā)病的診斷、治療，特別是對準分子激光治療近視、青光眼、淚道疾病及眼外傷的治療積累了豐富的臨床經(jīng)驗

熱西提內(nèi)科心血管疾病的診斷與治療

疾病科室

推薦文章

推薦問答

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測-檢查項目-大眾養(yǎng)生網(wǎng)

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測

基本信息

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測檢查簡介

幽門螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測檢查過程

相關(guān)醫(yī)生 更多>

相關(guān)醫(yī)院

專家推薦

李秀蓮 新生兒疾病的診斷、治療與護理。

盧秀英 危重病的救治。

席時華 青光眼的早期診斷及難治性青光眼的治療，眼底疾病及小兒弱視診治

李晶 眼科常見病、多發(fā)病的診斷、治療，特別是對準分子激光治療近視、青光眼、淚道疾病及眼外傷的治療積累了豐富的臨床經(jīng)驗

熱西提 內(nèi)科心血管疾病的診斷與治療

疾病科室

推薦文章

推薦問答

相關(guān)醫(yī)生
更多>

李秀蓮新生兒疾病的診斷、治療與護理。

盧秀英危重病的救治。

席時華青光眼的早期診斷及難治性青光眼的治療，眼底疾病及小兒弱視診治

李晶眼科常見病、多發(fā)病的診斷、治療，特別是對準分子激光治療近視、青光眼、淚道疾病及眼外傷的治療積累了豐富的臨床經(jīng)驗

熱西提內(nèi)科心血管疾病的診斷與治療