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(1)比色法:
①乳酸鉀、乳酸鈉也可作為LDH底物,但因其為水溶液,含量不夠準(zhǔn)確,且保存不當(dāng)易產(chǎn)生酮酸類物質(zhì),抑制酶促反應(yīng)。而乳酸鋰為固體,穩(wěn)定,易于稱量。
②除二乙醇胺緩沖液外,也可用Tris或焦磷酸緩沖液,避免了原金氏法中甘氨酸緩沖液對(duì)LDH的抑制作用,提高了陽性檢出率。
③比色應(yīng)在5~15min內(nèi)完成,否則吸光度降低。
④結(jié)果>2500U時(shí),可用生理鹽水稀釋標(biāo)本后再測(cè),其結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
(2)連續(xù)監(jiān)測(cè)法:
①標(biāo)本勿溶血,當(dāng)溶血達(dá)Hb0.8g/L時(shí),LDH活性可升高58%。
②標(biāo)本于室溫(25℃)保存,2天內(nèi)酶活性穩(wěn)定,冰箱保存酶活性降低,-20℃過夜LDH3、LDH4則全部失活。
③用血清或肝素抗凝血漿測(cè)定結(jié)果滿意,草酸鹽可抑制LDH活性。
④復(fù)溶后溶液變濁或初始吸光度>0.5應(yīng)棄去。
⑤利用正逆雙向反應(yīng)均可測(cè)定乳酸脫氫酶活性,但因反應(yīng)溫度、底物和緩沖液濃度不同,其參考區(qū)間也有差異。以乳酸和NAD為底物,在340nm監(jiān)測(cè)吸光度增高速率為正向反應(yīng),以LD-L表示;以丙酮酸和NADH為底物,監(jiān)測(cè)340nm吸光度下降速率為逆向反應(yīng),以LD-P表示。正逆反應(yīng)兩法相比,LD-L法的主要優(yōu)點(diǎn)是:A.正向反應(yīng)底物液的穩(wěn)定性比逆向反應(yīng)的穩(wěn)定性大,前者冰箱可保存6個(gè)月以上,而后者僅幾天;B.速率反應(yīng)的線性范圍(吸光度對(duì)監(jiān)測(cè)時(shí)間t作圖)較寬;C.重復(fù)性比LD-P好。由于逆向反應(yīng)速度比正向反應(yīng)速度快,其參考值約為LD-L的2倍。
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