其他皮膚病醫(yī)院國(guó)營(yíng)
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β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)
臨床標(biāo)本中分離金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌以及最近發(fā)現(xiàn)的腸球菌屬少數(shù)菌株對(duì)青霉素、氨芐青霉素出現(xiàn)耐藥。由于上述菌株產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶水解前述抗生素。檢測(cè)該酶有下列方法:
(一)微生物活性消失法
此法是以一株對(duì)青霉素高度敏感的枯草芽胞桿菌的指示菌,如待檢菌株產(chǎn)生β內(nèi)酰胺酶,破壞了青霉素,則在劃線兩邊有枯草芽胞菌生長(zhǎng),否則指示菌仍呈很大抑菌環(huán)。
(二)淀粉-碘測(cè)定法
β內(nèi)酰胺酶破壞β內(nèi)酰胺環(huán),碘與被打開(kāi)β內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)合,使藍(lán)色的淀粉-碘復(fù)合物轉(zhuǎn)變成無(wú)色。
方法:用pH6.0磷酸緩沖液配制青霉素懸液6000μg/ml,取該液0.1ml置于微量稀釋板凹孔中,挑選檢測(cè)菌株數(shù)個(gè)菌落混懸于其中,搖動(dòng)30min,靜置室溫中1h,加淀粉液2滴,再加碘液1滴,混合,立即觀察顏色變化,陽(yáng)性者當(dāng)加入碘液后,首先立即出現(xiàn)藍(lán)色、如在10min內(nèi)消失藍(lán)色,提示該菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶。
(三)酸測(cè)量法
青霉素被β-內(nèi)酶胺酶水解后成青霉素酸,pH值下降6.8以下,用酚紅指示劑,由紅(紫)色(原液:枸櫞酸緩沖液pH8.5)→黃色(pH6.8以下)。
(四)頭孢硝基噻吩顯色反應(yīng)
頭孢硝基噻吩(Nitrocefin)的β-內(nèi)酰胺環(huán)被β-內(nèi)酰胺酶打開(kāi),基質(zhì)由黃色變成紅色。
液體方法:10mg頭孢硝基噻吩溶解于lml的二甲基亞砜中,然后用0.1mol/LPBS(pH7.0)再稀釋1:20,最后濃度為500μg/m1,溶液呈黃或淡橙色,保存4~10℃,可用幾個(gè)星期。取該溶液0.05ml置放于微量稀釋板凹孔中或小試管中,挑取被試菌落,制成濃厚懸液,與凹孔中基質(zhì)液混和,室溫10~30min,頭孢硝基噻吩由黃變成紅色為陽(yáng)性,若顯色不明顯,觀察可延長(zhǎng)6h。
有報(bào)道紙片法用于流感嗜血桿菌和淋病奈瑟菌檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的結(jié)果是準(zhǔn)確的,但對(duì)于某些菌株產(chǎn)生少量而與菌細(xì)胞緊密結(jié)合的β-內(nèi)酰胺酶,如腐生葡萄球菌等,用液體法檢測(cè)更好。上述任何一種檢測(cè)方法都應(yīng)用質(zhì)量控制。
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三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國(guó)營(yíng)
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