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操作方法:
1.取無(wú)菌肝素抗凝血0.lml,加入1.8ml細(xì)胞培養(yǎng)液中,同時(shí)加入1000μg/m1PHA0.1m1,對(duì)照管不加PHA,將細(xì)胞置37℃、5%CO2培養(yǎng)3d,每天搖動(dòng)1次。
2.培養(yǎng)結(jié)束時(shí)吸棄大部分上清液,加入8.5g/LNH4Cl4ml混勻,置37℃水浴10min。
3.2500r/min離心10min,棄上清液,沉淀加5ml固定液,室溫作用5min。
4.2500r/min離心10min,棄上清液,留0.2ml沉淀細(xì)胞制片,迅速吹干。
5.吉姆薩染液染色10~20min,水洗,干燥。
6.油鏡計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞中轉(zhuǎn)化的細(xì)胞數(shù),計(jì)算轉(zhuǎn)化率。
結(jié)果判斷:
1.淋巴母細(xì)胞的形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞核的大小、核與胞漿的比例、胞漿染色性及核的構(gòu)造與核仁的有無(wú)。
⑴成熟的小淋巴細(xì)胞:與未經(jīng)培養(yǎng)的小淋巴細(xì)胞大小一樣,為6~8μm,核染色致密,無(wú)核仁,核與胞漿比例大,胞漿染色為輕度嗜堿性。
⑵過(guò)渡型淋巴細(xì)胞:比小淋巴細(xì)胞大,約10~20μm,核染色致密,但出現(xiàn)核仁,此為與成熟小淋巴細(xì)胞鑒別要點(diǎn)。
⑶淋巴母細(xì)胞:細(xì)胞體積增大,約20~30μm,形態(tài)不整齊,常有小突出,核變大,核質(zhì)染色疏松,有核仁1~2個(gè),胞漿變寬,常出現(xiàn)胞漿空泡。
⑷其它細(xì)胞:如中性粒細(xì)胞在培養(yǎng)72h后,絕大部分衰變或死亡呈碎片。
2.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的計(jì)算按上述分類檢查推片頭、體、尾三部分,計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞,算出百分率。轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞包括淋巴母細(xì)胞和過(guò)渡型淋巴細(xì)胞,未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞指的是成熟的小淋巴細(xì)胞。在正常情況下,PHA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率為60~80%,如為50~60%則偏低,50%以下則為降低。
再根據(jù)結(jié)果得出正確的判斷。
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