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取材:血液
血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的測(cè)定原理:
(1)比色法測(cè)定:ALT催化基質(zhì)中的丙氨酸和α-酮戊二酸反應(yīng),生成谷氨酸和丙酮酸,后者與2,4-二硝基苯肼作用,生成苯腙,在堿性條件下顯色。
(2)連續(xù)監(jiān)測(cè)法:在ALT催化的反應(yīng)中生成的丙酮酸,被LDH還原成乳酸,并使NADH氧化成NAD+,在340nm波長(zhǎng)下吸光度降低,NADH的氧化速率與ALT活力成正比。
試劑:
(1)比色法測(cè)定:
①0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.4)。
A液:稱磷酸二氫鉀13.6g,溶于水中,加水至1000ml,冰箱保存。
B液:稱磷酸氫二鈉(含兩個(gè)結(jié)晶水)17.6g,溶于水中,并加水至1000ml,冰箱保存。
取A液80ml,B液420ml混合,置冰箱內(nèi)保存即可。
②ALT基質(zhì)液:精確稱取DL-丙氨酸1.79g和α-酮戊二酸29.2mg,溶于50ml磷酸鹽緩沖液中,用1mol/LNaOH溶液(約0.5ml)校正pH7.4,再加磷酸鹽緩沖液至100ml,可穩(wěn)定2周。加麝香草酚90mg,可延長(zhǎng)使用時(shí)間。
③1mol/L2,4-二硝基苯肼(DNPH)溶液:稱取DNPH19.8mg,溶于1000ml1mol/LHCl中,置室溫保存。
④0.4mol/LNaOH溶液:溶解16.0gNaOH于水中,并加至1000ml,置帶塞塑料瓶?jī)?nèi),置室溫保存。
⑤2mmol/L丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液:可購買或自配。準(zhǔn)確稱取22.0mg丙酮酸鈉(AR),置于100ml容量瓶中,加0.05mol/L硫酸至刻度。
(2)連續(xù)監(jiān)測(cè)法:
①基質(zhì)液的成分和濃度(IFCC):100mmol/LTris緩沖液(pH7.5),15mmol/Lα-酮戊二酸,500mmol/LL-丙氨酸,0.18mmol/LNADH,0.1mmol/L磷酸吡哆醛,1200U/L乳酸脫氫酶。
②市售試劑盒:按說明書用蒸餾水或稀釋液溶解,用后置冰箱保存,一般可穩(wěn)定4天。
操作方法:
(1)比色法測(cè)定:其基質(zhì)液37℃預(yù)溫,按表1操作。
混勻,置37%水浴20min,各管加0.4mol/LNaOH溶液5ml,混勻,置室溫5min后,在505nm處用對(duì)照管調(diào)零點(diǎn),讀取各管吸光度,查標(biāo)準(zhǔn)曲線即得ALT活力單位。
(2)連續(xù)監(jiān)測(cè)法:各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)本室的分析儀型號(hào)及操作說明書而定。主要參數(shù):340nm波長(zhǎng),37℃,樣本與試劑體積比為1∶10。
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