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血氨-檢查項目-大眾養(yǎng)生網(wǎng)

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血氨

基本信息

  • 專科分類: 消化
  • 檢查分類: 肝功能檢查
  • 適用性別: 男女均適用
  • 是否空腹:  空腹
  • 手術(shù)參考價: 20元
  • 科 室: 消化

血氨檢查簡介

人體內(nèi)的氨是蛋白質(zhì)代謝過程中通過氨基酸脫氨基,腎臟使谷氨酰胺分解和腸道內(nèi)細菌的作用而生成。大部分氨在肝內(nèi)通過鳥氨酸循環(huán)合成尿素。一部分被用于酮酸的氨基化,合成谷氨酰胺,在腎內(nèi)形成銨鹽從尿中排出。血氨在診斷治療肝昏迷、肝性腦病中占重要地位,尿中氨測定是估價體內(nèi)酸堿平衡紊亂的指標之一,血氨的測定方法有離子交換樹脂法、直接法、電極法及酶法,其中酶法以其簡單、特異性高而被廣泛應(yīng)用。

血氨檢查過程

取材:血液

血氨的測定原理:血漿氨的酶法測定基于下列反應(yīng):

在過量α-酮戊二酸、NAD(P)H和足量谷氨酸脫氫脫氫酶(GLDH)條件下,酶促反應(yīng)的速率,即NAD(P)H轉(zhuǎn)變成NAD(P)+使340nm吸光度的下降速率與反應(yīng)體系中氨的濃度呈正比關(guān)系。

試劑:全部試劑必須用去氨水制備。去氨水用蒸餾水經(jīng)氫型陽離子交換樹脂處理獲得。

(1)66.7mmol/LKH2PO4溶液:取9.12gKH2PO4溶入去氨水中,定溶到1L,4℃保存。

(2)66.7mmol/LNa2HPO4溶液:取9.51gNa2HPO4溶解并加去氨水到1L,4℃保存。

(3)pH8.0(±0.05),66.7mmol/L磷酸鹽緩沖液(PB):取5ml“1”液及95ml“2”液,混合,4℃保存,穩(wěn)定3周。

(4)310mmol/Lα-酮戊二酸:取0.45gα-酮戊二酸,溶于5ml去氨水中,用3mol/L氫氧化鈉調(diào)pH至接近5.0時,改用0.1mol/L氫氧化鈉調(diào)pH至6.8(±0.01),切勿調(diào)得過堿,因高pH可破壞α-酮戊二酸,以去氨水稀釋到10ml,4℃穩(wěn)定10天;

(5)NADPH貯存液:稱約10mgN-ADPH(-20℃、干燥器保存)溶于1mlPB中取出50μl,以PB稀釋到5ml為工作液,以PB調(diào)零,1cm光徑,在340nm波長讀NADPH工作液的吸光度,計算NADPH貯存液中實際濃度:

6.22為NADPH的毫摩爾吸光系數(shù),據(jù)上式計算結(jié)果確定制備GLDH工作液中加入NADPH貯存液的量,使達到149μmol/L。

(6)GLDH工作液:根據(jù)GLDH酶制品(-20℃干燥器中保存)的比活,稱出酶活力為992U的相應(yīng)量(如比活為50U/mg蛋白,則稱20mg),如GLDH在甘油中,可按U/ml吸出992U的相應(yīng)體積,置50ml量瓶中,稱入ADP(-20℃,干燥器中保存)15mg,吸入計算量的NADPH貯存液,以PB稀釋到50ml,4℃保存可穩(wěn)定7天;

(7)氨標準貯存液,100mmol/L:稱?。∟H4)2SO4660.7mg,溶于去氨水定容到100ml,4℃保存;

(8)氨標準應(yīng)用液:用去氨水分別稀釋貯存液成25、50、100、及150μmol/L。

操作方法:所用分光光度計需配有37℃恒溫比色系統(tǒng)及340nm波長。如用自動分析儀,可根據(jù)本法反應(yīng)條件自行設(shè)計,樣品及試劑用量按比例減少。操作見表1,按B、S、U管先后順序進行。

混勻,于10s時讀A10s于70s時讀A70s,求各管的△A,即△A=A10s-A70s。

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