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抗丁型肝炎病毒IgM抗體-檢查項目-大眾養(yǎng)生網(wǎng)

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抗丁型肝炎病毒IgM抗體

基本信息

  • ??品诸悾?/b> 傳染病檢查
  • 檢查分類: 肝功能檢查
  • 適用性別: 男女均適用
  • 是否空腹:  空腹
  • 手術參考價: 40元
  • 科 室: 傳染病檢查

抗丁型肝炎病毒IgM抗體檢查簡介

HDV為缺陷病毒,依賴HBsAg才能復制,表現(xiàn)為HDV、HBV同時或重疊感染,其傳播途徑主要是生活接觸,也可通過血液制品、輸血、注射等途徑傳播。其實驗室檢查主要是檢測抗原和抗體。

抗丁型肝炎病毒IgM抗體檢查過程

化驗取材:血液

抗丁型肝炎病毒IgM抗體的測定原理:根據(jù)免疫學中抗原,抗體之間的特異性結合的原理,利用抗人免疫球蛋白IgM捕捉待檢血清中的IgM,然后加入丁型肝炎病毒抗原(HDAg)使之與血清中IgM抗HDV抗體結合,然后利用酶標記的抗-HDVIgG,它即具有與HDAg相互反應的免疫學特異性,又具有酶的催化,放大活性。當加入相應底物后,酶使底物氧化(HRP)或水解(AKP)從而使無色底物變?yōu)橛猩?。利用顏色的深淺或A值的高低確定IgM抗HDV抗體的有無和含量的高低。

試劑:

(1)聚苯乙烯塑料板:40孔或96孔板,進口或國產(chǎn)。

(2)可變微量加樣器:20μl,100μ1各1支。

(3)抗人IgM(μ鏈):鼠抗人IgM單克隆抗體或兔(羊)抗人IgM多克隆抗體。

(4)IgM抗HD陰性,陽性對照血清。

(5)HDAg:大腸桿菌表達的基因工程抗原粗提液。ELISA滴度:1∶640~1∶1280。

(6)HPR-抗HDVIgG:應用改進的過碘酸鈉法標記抗HDVlgG多克隆抗體,使用稀釋度1∶400~1∶4000(于10%小牛血清的PBS液中)。

(7)包被液:0.05mol/LpH9.5~9.6的碳酸鹽緩沖液(Na2CO315.9g,NaHCO329.3g加水到1000ML,1∶10稀釋使用)。

(8)洗液:0.01mol/LpH7.2~7.4PBST(內(nèi)含8.5G/LNaCL,0.5‰Tween20)。

(9)稀釋液:0.01mol/LpH7.2~7.4PBS。用于稀釋和標記抗體。

(10)底物液:用前新配制。4mg鄰苯二胺(OPD)+10ml基質(zhì)液(pH5.0磷酸,檸檬酸緩沖液,即Na2HPO418.4g、檸檬酸5.1g溶于1000ml離子水中4℃保存?zhèn)溆茫┐芑蠹?%H2O250μl混合均勻后立即使用。

(11)終止劑:2mol/LH2SO4。

操作方法:

(1)用0.05mol/LpH9.5~9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋抗人IgM單克隆抗體,包被聚苯乙烯板,每孔100μl,放4℃過夜。

(2)用PBST洗3次(中間不停留)拍干。

(3)每孔分別加入100μl1∶1000稀釋后的待檢血清和陰、陽性對照血清(陰性對照3孔,陽性對照2孔)放37℃1h。

(4)負壓下用PBST洗板3次(方法同上)抽干(將血清和廢液抽到消毒瓶內(nèi)防止污染環(huán)境)。

(5)每孔加入50~100μl經(jīng)適當稀釋后的HDAg(2~4個ELISA單位)放45℃1h。

(6)洗3次后,每孔加入50μlHRP-抗-HDVIgG抗體(于含1%小牛血清的PBS中)放42~45℃1h。

(7)洗3次后,加50μl新鮮配制的底物液,放室溫暗處顯色15~30min,當陽性對照顯黃色后,每孔加入1滴(25μl)2mol/LH2SO4終止反應。

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